Приложение 8 (обязательное)

Метод определения колифагов в сточных водах

8.1. Определение колифагов в сточной воде проводится методом прямого посева 3 объемов: до очистки – 0,1 мл, 1,0 мл и 10,0 мл;

после очистки – по 10,0 мл из одной пробы с последующим учетом зон лизиса (бляшек) на газоне E.coli K12 F⁺ в чашках Петри с питательным агаром. Для контроля используют чашку с чистым газоном E.coli K12 F⁺ на питательном агаре.

8.2. Проведение анализа

За 24 часа до проведения анализа необходимо произвести посев детекторной культуры E.coli K12 F⁺ на косяк с питательным агаром. Перед проведением анализа сделать смыв бактерий 5 мл стерильной водопроводной воды и по стандарту мутности приготовить взвесь культуры E.coli в концентрации 10⁹ бактериальных клеток в 1 мл.

Расплавить и остудить до 45 °С 2%-ный питательный агар (Хоттингера, МПА, на гидролизате кильки). Объем пробы 50 мл предварительно обработать 5 мл хлороформа путем интенсивного встряхивания в течение 15 минут и затем поставить пробу для полного осаждения хлороформа. Исследуемую воду внести в 3 стерильных чашки Петри по 10 мл в каждую. В остуженный питательный агар добавить смыв E.coli из расчета 1,0 мл смыва бактерий (в концентрации 10⁹ бактериальных клеток в 1 мл) на 100 мл агара и осторожно перемешать. Полученной смесью по 15 мл залить сначала пустую чашку Петри (контроль газона E.coli), а затем все чашки, содержащие исследуемую воду. Содержимое чашек (10 мл пробы и 15 мл агара) осторожно перемешать легким покачиванием. Чашки оставить при комнатной температуре для застывания на 30 минут, затем перевернуть и дном вверх поместить в термостат на 18 часов при температуре +37 °С.

8.3. Учет результатов.

Учет производят путем подсчета и суммирования бляшек, выросших на 3 чашках Петри в посеянном объеме с последующим пересчетом результата, выраженного в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 100 мл пробы воды. В контрольной чашке колифаги должны отсутствовать.

При наличии бляшек в контрольной чашке результат не учитывается. Необходимо повторить анализ с новой культурой этого же штамма E.coli K12 F⁺, приготовленного из другой ампулы.