Приложение 7 (обязательное)

Метод определения сальмонелл в сточных водах

Для обнаружения сальмонелл в сточных водах используют не менее двух сред накопления: магниевую, селенитовый бульон, Кауфмана, среду с охмеленным суслом и др. Приготовление питательных сред по МУ 2285-81.

Схема посева сточной воды до очистки, после биологической очистки до обеззараживания: 100 мл засевают в равное количество среды накопления удвоенной концентрации, 10 мл сточной жидкости засевают в 100 мл среды нормальной концентрации, 1 мл стока вносят в 10 мл среды нормальной концентрации.

Схема посева сточной воды после обеззараживания: 500 мл стока вносят в магниевую среду экспедиционной прописи; 500 мл – в такое же количество одной из других сред накопления удвоенной концентрации.

Посевы инкубируют при температуре 37 °С 18-20 часов. На следующий день при помутнении из сред накопления делают высев петлей на две чашки с висмут-сульфитным агаром с таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии. Среды накопления выращивают в термостате до 48 часов, чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С и просматривают через 18—24 часа.

При отсутствии роста на чашках через 24 часа, их оставляют в термостате для последующего просмотра через 48 часов, а из сред накопления делают повторный высев на висмут-сульфитный агар.

На висмут-сульфитном агаре колонии сальмонелл – круглые черные с сероватым металлическим блеском вокруг них, зеленые с черным центром и без него, вызывающие потемнение среды под колонией. С каждой чашки снимают по 4—5 типичных для сальмонелл колоний на комбинированную среду, позволяющую устанавливать ферментацию глюкозы, лактозы, сахарозы, образование сероводорода, расщепление мочевины (среды Ресселя, Олькеницкого и др.).

При обнаружении на комбинированной среде типичной для сальмонелл реакции (ферментируют глюкозу, не расщепляют лактозу, сахарозу и мочевину, образуют сероводород) проводят серологическую индентификацию по определению серотипа по общепринятой методике.